近日，成都新百基生物科技有限公司技術(shù)人員在對(duì)病毒核酸提取試劑盒進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。新華社記者 劉坤 攝

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局（以下簡(jiǎn)稱國(guó)家藥監(jiān)局）網(wǎng)站顯示，根據(jù)《醫(yī)療器械應(yīng)急審批程序》，目前已有7個(gè)新冠病毒核酸檢測(cè)試劑經(jīng)過(guò)應(yīng)急審批。近日，有報(bào)道稱，北京中日友好醫(yī)院出現(xiàn)一名三次咽拭子檢測(cè)均為陰性、通過(guò)檢測(cè)下呼吸道樣本才確診為新冠肺炎的患者。

為什么核酸檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陰性？不同企業(yè)的試劑檢測(cè)產(chǎn)品有何異同？

擴(kuò)增讓新冠病毒現(xiàn)形

大多數(shù)生物體的遺傳物質(zhì)是DNA，只有少數(shù)病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，例如這次的新冠病毒。為了知道人體內(nèi)是否含有新冠病毒，需要采集人體樣本進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）》，在鼻咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液、糞便等標(biāo)本中可檢測(cè)出新冠病毒的RNA。

但實(shí)際上，樣本中病毒的遺傳物質(zhì)極其微量。而且與DNA相比，RNA極易降解。問(wèn)題來(lái)了，樣本中的RNA病毒量少又不穩(wěn)定，怎樣才能逼這只妖怪“現(xiàn)形”呢？

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（RT-PCR技術(shù)）就是“照妖鏡”。該技術(shù)能將病毒的RNA合成為DNA，然后對(duì)合成DNA進(jìn)行擴(kuò)增，再通過(guò)熒光探針檢測(cè)這些擴(kuò)增產(chǎn)物。熒光探針就像雷達(dá)一樣，一旦鎖定目標(biāo)就會(huì)發(fā)出信號(hào)。

擴(kuò)增產(chǎn)物越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。核酸檢測(cè)就是通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的累積來(lái)確定樣本中是否有病毒核酸。目前，獲批的新冠病毒核酸檢測(cè)試劑使用的均是RT-PCR技術(shù)。

中國(guó)工程院院士、清華大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程系講席教授程京接受科技日?qǐng)?bào)記者采訪時(shí)表示，除RT-PCR這一熱循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)之外，等溫核酸序列擴(kuò)增技術(shù)（NASBA技術(shù)）和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP技術(shù)）等恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)也在分子診斷領(lǐng)域中扮演著重要角色。

“目前，獲批的核酸檢測(cè)試劑產(chǎn)品都是單一指標(biāo)的，即只能用于檢測(cè)新冠病毒這一種病毒。”程京坦言，對(duì)于大量疑似病人來(lái)說(shuō)，這類檢測(cè)試劑作用有限，臨床上急需能一次性檢測(cè)多個(gè)病原體的檢測(cè)試劑產(chǎn)品。

審批從簡(jiǎn)但該有的流程不會(huì)少

為應(yīng)對(duì)突發(fā)的新冠肺炎疫情，國(guó)家藥監(jiān)局迅速啟動(dòng)醫(yī)療器械應(yīng)急審批程序，加快審評(píng)審批速度，擴(kuò)大新冠病毒核酸檢測(cè)試劑供給。在獲取新冠病毒RNA序列后，多家企業(yè)在短短幾天內(nèi)迅速生產(chǎn)出檢測(cè)試劑產(chǎn)品，并很快獲批以供應(yīng)前線需求。

南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)系教授楊蓉西撰文稱，正常情況下，核酸檢測(cè)試劑從研發(fā)到臨床再到拿證需要3—5年，甚至更長(zhǎng)。但緊急情況下，簡(jiǎn)化流程符合需要。“質(zhì)量檢和正式臨床試驗(yàn)可以暫時(shí)不做，但是基本的研發(fā)流程，少量的預(yù)臨床試驗(yàn)，以及標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)都是需要的。”

2月8日，在國(guó)務(wù)院聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制召開(kāi)的新聞發(fā)布會(huì)上，國(guó)家藥監(jiān)局器械注冊(cè)司稽查專員江德元對(duì)有關(guān)核酸檢測(cè)試劑有效性的質(zhì)疑作出回應(yīng)。他表示，已批準(zhǔn)的產(chǎn)品都有相應(yīng)的臨床使用實(shí)驗(yàn)，完成了產(chǎn)品的注冊(cè)檢驗(yàn)，質(zhì)量管理體系檢查，提交了臨床評(píng)價(jià)資料和相應(yīng)的研究資料，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的審批程序。相關(guān)資料表明，產(chǎn)品性能能夠達(dá)到技術(shù)要求的規(guī)定，產(chǎn)品安全性、有效性和質(zhì)量可靠性可以得到保障。

程京也告訴記者：“檢測(cè)試劑還要通過(guò)3家以上獨(dú)立醫(yī)學(xué)機(jī)構(gòu)的臨床樣本檢測(cè)并出具臨床試驗(yàn)報(bào)告。中國(guó)食品藥品檢定研究院也會(huì)測(cè)試產(chǎn)品性能，給出鑒定報(bào)告，判定檢測(cè)試劑產(chǎn)品是否滿足安全性、可靠性、有效性。滿足不了這些硬性指標(biāo)，檢測(cè)試劑在實(shí)驗(yàn)室的效果再好，也不會(huì)拿到注冊(cè)批文。”

也就是說(shuō)，雖然特事特辦，但國(guó)家藥監(jiān)局還是遵循“統(tǒng)一指揮、早期介入、隨到隨審、科學(xué)審批”的原則，確保產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控。

多種因素導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果有偏差

有疫情一線的醫(yī)生反映，一些患者核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性，但CT影像卻顯示為新型冠狀病毒肺炎，病情也在不斷發(fā)展。

“當(dāng)前，用核酸檢測(cè)新冠肺炎敏感性即陽(yáng)性率只有30％—50％，假陰性帶來(lái)的漏檢是個(gè)大問(wèn)題。”丹娜（天津）生物科技有限公司首席科學(xué)家周澤奇告訴科技日?qǐng)?bào)記者。

為何核酸檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陰性？

程京在采訪中表示，這可能由多種因素導(dǎo)致。“首先，試劑盒研發(fā)需要十幾種關(guān)鍵化學(xué)原材料，比如酶、合成DNA等。不同企業(yè)選擇的原材料供貨方不同，酶的活性、DNA的純度就會(huì)有差別，這都會(huì)影響到核酸檢測(cè)試劑的準(zhǔn)確度。”程京說(shuō)。

“而在試劑盒產(chǎn)品研發(fā)過(guò)程中，原材料制備、生產(chǎn)工藝選擇、研發(fā)人員能力、技術(shù)手段使用，每一個(gè)環(huán)節(jié)都有可能產(chǎn)生偏差，誤差累計(jì)起來(lái)也會(huì)導(dǎo)致試劑盒產(chǎn)品靈敏度出現(xiàn)差別。”程京說(shuō)。

再者，取樣過(guò)程不規(guī)范也會(huì)影響后續(xù)的分離和測(cè)定結(jié)果。以使用最普遍、操作簡(jiǎn)單的咽拭子采集為例，由于咽部的新冠病毒含量少，所以有可能造成漏檢。“雖然只是在咽部拿棉簽劃幾下，但如果沒(méi)有良好的專業(yè)實(shí)操技能，樣本的采集部位和手法可能不符合規(guī)范，就可能直接影響檢測(cè)結(jié)果。”程京表示，此外，剛被感染的病人因體內(nèi)帶毒數(shù)量有限，也可能出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果為陰性。

送樣本時(shí)必須采取冷鏈運(yùn)輸，如果在運(yùn)送過(guò)程中樣本受損，也會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

核酸檢測(cè)出現(xiàn)假陰性的問(wèn)題，一度引發(fā)用CT影像代替核酸檢測(cè)試劑確診新冠肺炎的呼聲。近日發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）》中，在“疑似病例”和“確診病例”之外新增了一個(gè)“臨床診斷病例”，并將“疑似病例具備肺炎影像特征者”作為其診斷標(biāo)準(zhǔn)（只限于湖北省之內(nèi)），這也意味著CT影像結(jié)果成了“臨床診斷病例”的判定依據(jù)。

浙江大學(xué)附屬第二醫(yī)院放射科主任醫(yī)師、中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)放射醫(yī)師分會(huì)呼吸專委會(huì)主任委員張敏鳴教授曾指出，CT影像結(jié)果陽(yáng)性也存在誤診可能。他還提到，如果都去做CT檢查而忽略防護(hù)，容易造成交叉感染。專家表示，無(wú)論是CT檢查還是核酸檢測(cè)，都不能保證絕對(duì)的準(zhǔn)確性。

“盡管核酸檢測(cè)存在假陰性問(wèn)題，但核酸檢測(cè)是病原診斷的一個(gè)依據(jù)，也是目前確診的最重要依據(jù)。”國(guó)家醫(yī)療專家組成員、北京大學(xué)第一醫(yī)院感染疾病科主任王貴強(qiáng)表示。

（原標(biāo)題 新冠病毒核酸檢測(cè)出現(xiàn)假陰性 到底是什么影響了準(zhǔn)確率）

[責(zé)任編輯：楊凡、武云泉]

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